环境微生物学实验方法与技术

《环境微生物学实验方法与技术》系统地介绍了环境微生物实验研究中所涉及的基本原理和技术，内容注重基础性和实用性。全书分四部分共十六章，包括基础微生物实验部分、微生物生态学实验部分、环境微生物监测与评价实验部分、污染物微生物处理与资源化实验部分。基础微生物实验部分介绍了显微技术、微生物制片和染色技术、培养基制作和消毒灭菌、微生物接种和培养技术及分离和鉴定技术、菌种保藏技术等；微生物生态学实验部分介绍了环境因素对微生物生长与死亡的影响、土壤微生物生物量的测定技术、土壤微生物群落及其多样性的研究方法等；环境微生物监测与评价实验部分介绍了土壤、水体、空气中微生物的监测方法，微生物毒理学监测方法等；污染物微生物处理与资源化实验部分介绍了废水处理中微生物的测定、废水处理中活性污泥的培养与驯化、微生物对有机物降解性能的研究、固体废物处理及废物的资源化方法技术等。

部分基础微生物实验方法与技术

章显微技术1

节常用显微镜的构造1

一、普通光学显微镜(general microscope)1

二、暗视野显微镜（暗场显微镜）(darkfield microscope)4

三、相差显微镜（phase microscope）5

四、荧光显微镜（Flurecence Microscope）6

五、电子显微镜8

第二节常用显微镜的使用方法及注意事项11

一、普通光学显微镜的使用方法及注意事项11

二、暗视野显微镜的使用方法及注意事项13

三、相差显微镜的使用方法及注意事项14

四、荧光显微镜的使用方法及注意事项14

第二章微生物制片及染色技术15

节微生物的制片方法15

一、压滴标本制作无菌操作制片15

二、悬滴标本制作15

三、涂片法16

四、插片法16

五、搭片法16

六、玻璃纸法17

七、压片法（也称印片法）17

八、透明薄膜培养法17

九、单细胞菌块17

十、其他方法17

第二节微生物染色技术及形态观察17

一、染色基本原理及染料种类的选择17

实验21细菌单染色法及形态的观察18

实验22细菌的革兰染色法20

实验23细菌鞭毛染色及运动的观察22

实验24细菌芽孢、荚膜的染色及观察24

实验25放线菌活体染色及形态观察26

实验26霉菌的活体染色及形态观察27

第三章灭菌与除菌29

节实验室常用灭菌方法29

一、热灭菌29

二、过滤除菌33

三、紫外线杀菌35

四、化学药剂消毒与杀菌35

第二节各类培养基常采用的灭菌方法及注意事项37

一、各类培养基的灭菌法37

二、培养基灭菌的注意事项37

第四章培养基的配制39

节培养基的配制原则39

一、选择适宜的营养物质39

二、营养物质浓度及配比合适39

三、控制pH值条件40

第二节培养基的种类及配置过程40

一、培养基的种类40

二、培养基的配制方法43

实验41常用培养基的配置45

第五章微生物接种与培养技术48

节微生物的接种技术48

实验51微生物的各种接种方法48

第二节微生物的培养技术51

一、微生物培养的一般问题51

二、好气性微生物培养法52

三、厌气性微生物培养法55

实验52用厌氧袋法培养丙酮丁醇梭状芽孢杆菌59

第六章微生物的分离及鉴定技术62

节微生物的纯种分离方法62

一、稀释混合倒平板法62

二、稀释涂布平板法62

三、平板划线分离法63

实验61土壤微生物的分离技术63

第二节微生物生长的测定技术66

一、生长测定66

二、繁殖测定67

三、群体生长规律——生长曲线测定67

实验62微生物菌体大小的测定方法68

实验63微生物数量的测定70

实验64微生物生长曲线的测定72

第三节微生物生理特征测定技术73

实验65微生物需氧性的测定73

实验66微生物生长温度的测定74

实验67微生物生长pH值范围的测定74^[1]

实验68固氮能力的检测75

第四节微生物生化特征测定技术75

实验69糖类发酵实验75

实验610甲基红试验76

实验611淀粉水解试验77

实验612纤维素水解试验77

实验613果胶水解试验78

实验614细胞色素氧化酶试验79

实验615过氧化氢酶试验80

实验616TTC试验80

实验617硝酸盐还原试验81

实验618α活力的测定方法82

实验619蛋白酶活力的测定方法83

第七章菌种保藏技术86

实验71菌种的保藏方法86

第二部分环境微生物生态学实验方法与技术

第八章环境因素对微生物生长与死亡的影响93

节营养和氧气对微生物生长发育的影响93

实验81营养元素对微生物生长的影响93

实验82氧和CO2浓度对微生物生长的影响95

第二节物理和化学因素对微生物生长发育的影响97

实验83温度对微生物生长的影响97

实验84渗透压对微生物生长的影响98

实验85氢离子浓度对微生物生长的影响99

实验86化学药剂对微生物生长的影响100

第九章土壤微生物的生物量的测定方法102

实验91土壤微生物生物量碳的测定102

实验92土壤微生物生物量氮的测定104

实验93土壤微生物生物量磷的测定105

实验94土壤微生物生物量硫的测定107

第十章微生物多样性的测定方法109

节PCR技术的基本原理与方法109

实验101PCR扩增技术与方法110

实验102微生物总DNA中的16SrDNA PCR扩增技术112

实验103凝胶中DNA的回收、测序及系统发育树的构建113

第二节微生物多样性的测定方法114

实验104Biolog分析方法115

实验105PLFA分析方法117

实验106PCRDGGE分析方法120

第三部分环境微生物监测与评价技术

第十一章水中微生物监测123

节水样的采集和保存123

一、采样123

二、样品保存125

第二节水体中微生物数量的监测125

实验111水中细菌总数的监测125

实验112水中大肠菌群(Coliform group)的监测127

实验113水中粪链球菌的监测136

实验114水中病毒的监测139

实验115水体沉积物中的H2S产生菌的测定141

实验116循环水冷却系统中有关的微生物监测142

实验117应用PCR与基因DNA分子探针监测污染水体大肠杆菌146

实验118富营养化湖泊中藻类的监测（叶绿素a法）149

实验119PFU微型生物群落监测法151

第十二章土壤中微生物的监测155

节土样的采集及保存155

一、土壤环境样品采集155

二、样品的处理与保存157

第二节土壤中微生物数量及组成的监测158

实验121土壤中微生物数量的监测158

实验122微生物在自然界氮素循环中的作用159

实验123利用16SrDNA方法分析不同污染土壤中微生物种群的变化161

第十三章空气中微生物的监测164

节空气的采样方法及保存164

一、样品的采集方法164

第二节空气中微生物数量的监测166

实验131空气中细菌数量的监测166

第十四章生物毒理学检测与评价168

实验141发光菌的生物毒性测试方法168

实验142根据硝化细菌的相对代谢率检测环境污染物的综合生物毒性实验171

实验143采用细菌脱氢酶检测化合物毒性——水质毒性快速测定仪法173

实验144用Ames法检测环境中致癌物176

第四部分污染物微生物处理与资源化技术

第十五章污染物微生物处理技术180

节废水生物处理中的活性污泥180

实验151活性污泥微生物的显微镜观察及微型动物的计数180

实验152活性污泥中丝状微生物的鉴别186

实验153活性污泥脱氢酶活性的测定190

实验154活性污泥耗氧速率、废水可生化性及毒性的测定193

第二节微生物在污染物降解中的应用195

实验155光合细菌的培养及其对高浓度有机废水的净化作用195

实验156酚降解微生物的分离和解酚能力的测定196

实验157微生物对有机磷农药的降解198

实验158微生物对表面活性剂的降解200

实验159微生物细胞的固定化及其在废水生物处理中的应用202

实验1510微生物吸附法去除重金属203

实验1511生物过滤法对含氨废气的处理205

第十六章固体废物处理与资源化方法207

实验161垃圾堆肥中纤维素分解菌的计数和分离207

实验162利用酒精废液生产单细胞蛋白208

实验163固体废物的固体发酵212

参考文献214^[1]